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想在貴公司合成miRNA或mRNA FISH探針，需要提供那些信息？

需要提供的信息：① 種屬（Human, Mouse, Rat, Rabbit等）；② 基因名稱，未知的基因需要提供序列；

mRNA或miRNA探針的價(jià)格是多少，能檢測(cè)多少片子，標(biāo)記探針的周期？都包括那些內(nèi)容，是否包含陰性對(duì)照、FISH雜交液等輔助組分？

mRNA或miRNA探針價(jià)格2800元，體積是50μl，和雜交液按1：50-100稀釋，能檢測(cè)100-200張片子。 mRNA或miRNA探針的備貨周期，自客戶確認(rèn)下訂單日起計(jì)，2周內(nèi)發(fā)貨。 mRNA或miRNA包括了1ml FISH RNA 雜交液、1ml DAPI-抗熒光淬滅封片劑、50μl陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照探針(陰性、陽(yáng)性對(duì)照只能選一種)。

貴公司合成的mRNA探針，是cDNA探針，還是cRNA探針，長(zhǎng)度大概多少？

我們合成的mRNA探針屬于cRNA探針，長(zhǎng)度40－600bp。

檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)；檢測(cè)沒(méi)有結(jié)果，如何收費(fèi)？

miRNA和mRNA的檢測(cè)費(fèi)用相同：每個(gè)標(biāo)本1800元/標(biāo)本，不包含目的探針的費(fèi)用，但包含對(duì)照U6 （miRNA）或GAPDH （mRNA）的內(nèi)參探針費(fèi)用和檢測(cè)費(fèi)用，拍照及結(jié)果統(tǒng)計(jì)。如果陽(yáng)性對(duì)照有結(jié)果，無(wú)論miRNA或mRNA是否有結(jié)果，均正常收費(fèi)，如果對(duì)照U6沒(méi)有結(jié)果，不收檢測(cè)費(fèi)。

DNA FISH探針收費(fèi)，如何保證質(zhì)量？

每個(gè)目的基因探針3600元，15T，對(duì)照探針3600元，15T，贈(zèng)送DAPI-抗熒光淬滅封片劑（封片的同時(shí)，減緩熒光淬滅），另本公司還提供專門針對(duì)DNA FISH的檢測(cè)試劑盒。探針標(biāo)記之后，我們都會(huì)進(jìn)行中期染色體質(zhì)檢，質(zhì)量過(guò)關(guān)才發(fā)貨。

檢測(cè)miRNA或mRNA標(biāo)本的收集、處理與保存

石蠟切片：石蠟塊或石蠟切片保存時(shí)間不超過(guò)5年的標(biāo)本可以檢測(cè)miRNA，不超過(guò)半年的標(biāo)本可以檢測(cè)mRNA。收集標(biāo)本后，請(qǐng)立即用10%中性福爾馬林浸泡，固定24小時(shí)后，石蠟包埋切片。收集到標(biāo)本后，最好立即固定，然后切片，不要將標(biāo)本儲(chǔ)存在-80℃，-80℃儲(chǔ)存后影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。冰凍切片：取標(biāo)本后，立即-80℃冰凍，如果不能馬上切片，-80℃保存，干冰運(yùn)輸。冰凍切片保存時(shí)間不超過(guò)2年的標(biāo)本可以檢測(cè)miRNA 或mRNA。

如何用FISH定位某個(gè)基因？

例如：需要檢測(cè)兩個(gè)目的基因，例如MLAA-34及MLAA-22，能用FISH做這個(gè)兩個(gè)基因的染色體定位嗎？如果是檢測(cè)這兩個(gè)基因在哪幾號(hào)染色體的哪個(gè)區(qū)段，2個(gè)（探針）混合在一起檢測(cè)，能達(dá)到效果嗎？對(duì)于已知基因，想定位某個(gè)基因在哪幾號(hào)染色體上，通過(guò)“目的基因探針和染色體對(duì)照探針”結(jié)合起來(lái)，才能實(shí)現(xiàn)，單純地用使用某個(gè)目的基因探針，是不能定位的。對(duì)于未知基因，由于不知道使用哪個(gè)染色體的對(duì)照探針，所以只能靠Gimsa染色后，再做FISH。“Gimsa+FISH”檢測(cè)周期至少1個(gè)月。

想針對(duì)一個(gè)1000bp左右的片段設(shè)計(jì)DNA探針，單拷貝的，可行嗎？

片段比較小，直接熒光標(biāo)記（FITC，Texas Red、Rhodamin）探針很難檢測(cè)出來(lái)。可以用地高辛標(biāo)記的探針，熒光信息放大系統(tǒng)（ABC或TSA放大系統(tǒng) ）嘗試一下，但是不保證能檢測(cè)到，文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)檢測(cè)到的最短的片段是780bp。

探針的用量是否與涂片的濃度有關(guān)？比如，一張玻片上一千個(gè)細(xì)胞，另一張是一百個(gè)細(xì)胞，探針用量一樣嗎？

與細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系不大，一般20mm×20mm玻片面積（蓋玻片），5-10μl探針已經(jīng)足夠。探針的用量一般取決于標(biāo)本面積的大小和所使用的蓋玻片的大小，使用20mm×20mm的蓋玻片，加5-10μl探針，使用20mm×40mm的蓋玻片，加10-20μl探針。

檢測(cè)某個(gè)融合基因，熒光定量或FISH方法，哪種好一點(diǎn)。

如果是已知的位點(diǎn)，可以做RT-PCR；如果是未知位點(diǎn)，則要用FISH檢測(cè)； RT-PCR檢測(cè)的費(fèi)用較低，F(xiàn)ISH費(fèi)用比較昂貴。

貴公司生物的DNA FISH探針對(duì)標(biāo)本有什么要求，制備好中期染色體涂片的R顯帶可以嗎？到時(shí)可不可以一起雜交？

我們公司生產(chǎn)的探針適用于中期染色體滴片、細(xì)胞爬片、石蠟切片、可以R顯帶，但是R顯帶制備比較難，制備G顯帶的多一些（G顯帶每標(biāo)本1000元）。但是R帶與FISH結(jié)合的概率很小，所以做起來(lái)有一定的難度。

檢測(cè)某基因的拷貝數(shù)，是不是只能通過(guò)FISH檢測(cè)，RT-PCR能檢測(cè)嗎？

RT-PCR不能檢測(cè)某基因的拷貝數(shù)或者是否擴(kuò)增，它檢測(cè)的是基因表達(dá)的相對(duì)高低。檢測(cè)某個(gè)基因的拷貝數(shù)，只能通過(guò)FISH檢測(cè)。

細(xì)胞本身帶GFP綠色熒光，使用地高辛標(biāo)記miRNA的探針，抗地高辛的羅丹明熒光二抗，還有DAPI，細(xì)胞本身帶GFP綠色熒光會(huì)不會(huì)對(duì)熒光二抗和DAPI的顯色產(chǎn)生影響？

不會(huì)影響熒光二抗和DAPI的顯色（DAPI是藍(lán)色，GFP是綠色，羅丹明熒光二抗是紅色的）,但是容易串色。

觀察DAPI的熒光應(yīng)使用哪種濾光片，會(huì)不會(huì)和GFP重疊？

觀察DAPI應(yīng)該使用紫外濾光片或者波長(zhǎng)在300～400nm的都可以（激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)），一般熒光顯微鏡都有。有可能串色，但是影響不大。我們實(shí)驗(yàn)室曾做過(guò)，細(xì)胞自身帶GFP綠色熒光和紅色熒光的FISH。

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